歡迎進(jìn)入柏萊源（天津）生物科技有限公司網(wǎng)站！
13302035784
歡迎進(jìn)入柏萊源（天津）生物科技有限公司網(wǎng)站！
13302035784
TECHNICAL ARTICLES
RNA提取實(shí)驗(yàn)可能遇到各種意想不到的問題，導(dǎo)致結(jié)果不理想。本文總結(jié)了實(shí)驗(yàn)中高頻的幾類問題，分析了可能原因，并提供了針對(duì)性的解決方案，希望能成為您實(shí)驗(yàn)臺(tái)上的快速參考指南。Q1：RNA得率很低，甚至沒有RNA可能原因解決方案樣本量過少增加起始樣本量。對(duì)于微量樣本，可加入糖原（20mg/mL）或線性丙烯酰胺作為助沉劑。樣本裂解/勻漿不徹-底確保組織研磨成粉末狀，或細(xì)胞被充分吹打裂解。對(duì)于難裂解組織，可增加裂解液用量或延長孵育時(shí)間。沉淀時(shí)丟失尤其注意微量RNA沉淀可能肉眼不可見。棄上...
TRIzol法是RNA提取的金標(biāo)準(zhǔn)方法，由Chomczynski和Sacchi在1987年首-次描述，至今仍是實(shí)驗(yàn)室常用的技術(shù)之一。它基于酸性酚-異硫氰酸胍單相裂解系統(tǒng)，能高效裂解細(xì)胞并抑制RNase活性。本文將為您詳細(xì)拆解TRIzol法提取RNA的每一步，并指出操作中的關(guān)鍵注意事項(xiàng)，助您成功獲得高質(zhì)量RNA。實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備樣本：已處理好的組織勻漿或細(xì)胞裂解液（每50-100mg組織或1×10?細(xì)胞加入1mLTRIzol）。試劑：氯仿、異丙醇、75%乙醇（用RNase-free水...
在RNA提取的眾多方法中，基于單相裂解試劑的液相分離法是經(jīng)典、應(yīng)用廣泛的技術(shù)。其中，以ThermoFisher的TRIzol為代表的含氯仿方法和以Vazyme的FreeZol為代表的免氯仿方法為常見。面對(duì)這兩種選擇，實(shí)驗(yàn)人員該如何權(quán)衡？本文將對(duì)這兩種方法的原理、優(yōu)缺點(diǎn)進(jìn)行詳細(xì)對(duì)比，并提供選擇建議。一、方法原理概述兩種方法的核心原理相似：使用含有異硫氰酸胍和苯酚/類似物的單相裂解試劑裂解細(xì)胞，使RNA與核蛋白復(fù)合物分離。隨后通過加入特定試劑，使溶液分為不同相，從而分離RNA、D...
RNA提取的成功率，很大程度上取決于起始樣本處理的質(zhì)量。無論是堅(jiān)韌的動(dòng)植物組織，還是脆弱的貼壁細(xì)胞，不恰當(dāng)?shù)奶幚矸绞蕉紩?huì)導(dǎo)致RNA產(chǎn)量低、純度差甚至降解。本文將詳細(xì)講解針對(duì)不同類型樣本的前處理技巧，助您從源頭把控實(shí)驗(yàn)質(zhì)量。樣本處理的原則快速：離體樣本的基因表達(dá)譜會(huì)迅速發(fā)生變化，RNA也開始降解。從樣本離體到進(jìn)入裂解液的時(shí)間應(yīng)盡可能短。充分：裂解液必須與所有細(xì)胞充分接觸，確保細(xì)胞膜和核膜被完-全破壞，釋放全部RNA。低溫：在研磨等未加入強(qiáng)變性裂解液的步驟中，全程保持低溫（如使用...
在分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室中，RNA提取是下游實(shí)驗(yàn)（如RT-PCR、Northernblot）成功的基礎(chǔ)。然而，RNA是一種極易降解的分子，其穩(wěn)定性遠(yuǎn)低于DNA，這主要是因?yàn)榄h(huán)境中無處不在的RNA酶（RNase）。RNase非常穩(wěn)定，無需輔助因子即可發(fā)揮活性，且耐熱、耐酸堿。因此，在實(shí)驗(yàn)開始前，營造一個(gè)無RNase的環(huán)境是獲得高質(zhì)量RNA的第-步，也是最重要的一步。為什么要重視無RNase環(huán)境？RNase廣泛存在于自然界，尤其是我們的皮膚、毛發(fā)、唾液和汗液中。此外，實(shí)驗(yàn)室空氣中的灰塵...
在細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)中，即便做好了細(xì)胞狀態(tài)、核酸處理、培養(yǎng)條件等基礎(chǔ)把控，仍可能出現(xiàn)轉(zhuǎn)染效率低、細(xì)胞死亡率高、實(shí)驗(yàn)重復(fù)性差等問題，這些問題往往由細(xì)節(jié)操作不當(dāng)或參數(shù)設(shè)置不合理導(dǎo)致。本文針對(duì)轉(zhuǎn)染中常見的3類問題，分享精準(zhǔn)的排查方向和快速解決思路，幫你高效解決實(shí)驗(yàn)難題。問題1：轉(zhuǎn)染效率低，外源核酸表達(dá)量差核心排查方向：細(xì)胞狀態(tài)、核酸質(zhì)量、培養(yǎng)條件快速解決思路：1.檢查細(xì)胞匯合度是否在50%-70%的范圍，若過高/過低，重新調(diào)整細(xì)胞鋪板密度，待細(xì)胞進(jìn)入對(duì)數(shù)生長期后再進(jìn)行轉(zhuǎn)染；2.檢測(cè)核酸純...
細(xì)胞轉(zhuǎn)染的操作手法直接影響轉(zhuǎn)染復(fù)合物的分布、細(xì)胞攝取效率，甚至細(xì)胞的存活狀態(tài)——粗暴操作易破壞細(xì)胞和轉(zhuǎn)染復(fù)合物，而未優(yōu)化的試劑比例則會(huì)導(dǎo)致轉(zhuǎn)染效率低、細(xì)胞毒性高。本文分享實(shí)操性極-強(qiáng)的轉(zhuǎn)染操作技巧，從細(xì)節(jié)入手，讓轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)更精準(zhǔn)、高效。操作細(xì)胞轉(zhuǎn)染操作的核心原則是輕柔，全程減少對(duì)細(xì)胞的機(jī)械沖擊，保證轉(zhuǎn)染復(fù)合物的完整性，具體操作要點(diǎn)：1.滴加轉(zhuǎn)染復(fù)合物時(shí)，采用懸空轉(zhuǎn)圈滴加的方式，將復(fù)合物滴入培養(yǎng)皿/細(xì)胞孔板中，避免移液器槍頭直接接觸細(xì)胞層，防止沖擊導(dǎo)致細(xì)胞脫落；2.滴加完成后，輕...
細(xì)胞培養(yǎng)的微環(huán)境，尤其是培養(yǎng)基的組成，在細(xì)胞轉(zhuǎn)染過程中扮演著微妙而關(guān)鍵的角色。血清和抗生素這兩個(gè)常規(guī)培養(yǎng)的必需品，在轉(zhuǎn)染時(shí)卻可能成為“絆腳石”。了解其作用機(jī)制并采取正確策略，是優(yōu)化轉(zhuǎn)染條件、避免細(xì)胞死亡的重要一環(huán)。一、血清：轉(zhuǎn)染復(fù)合物形成的干擾者1.為什么血清會(huì)降低轉(zhuǎn)染效率？大多數(shù)轉(zhuǎn)染試劑（如陽離子脂質(zhì)體、陽離子聚合物）的作用原理是帶正電荷，與帶負(fù)電荷的核酸結(jié)合形成復(fù)合物，再通過細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞。而血清中含有大量帶負(fù)電荷的蛋白質(zhì)，它們會(huì)與轉(zhuǎn)染試劑競爭結(jié)合核酸，從而干擾甚至阻斷轉(zhuǎn)...
當(dāng)前位置：